硼酸溶液為外用殺菌劑、消毒劑、收斂劑和防腐劑。對多種細(xì)菌真菌均有抑制作用。作用原理是它能與細(xì)菌蛋白質(zhì)中的氨基結(jié)合而發(fā)揮作用。臨床上,3%~4%溶液用于皮膚、黏膜(腔)、膀胱、角膜傷口的沖洗清潔,口腔炎和咽喉炎時(shí)含漱,急性濕疹和急性皮炎伴大量滲液時(shí)濕敷。在《中國藥典》明確規(guī)定外用滅菌制劑必須進(jìn)行無菌檢查并通過方法驗(yàn)證。本研究對硼酸溶液無菌檢查方法進(jìn)行了驗(yàn)證。

1材料與試藥

1.1 儀器:SPX-250B-Z型生化培養(yǎng)箱, 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱,醫(yī)用凈化工作臺(tái), 智能集菌儀NAI-JJY-Z,封閉式薄膜過濾器(那艾儀器 濾膜孔徑:0.45 μm)。

 1.2試藥:改良馬丁培養(yǎng)基; 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基;營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基;營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基;玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基;蛋白胨均

2.2預(yù)試驗(yàn) :采用HTY2000集菌儀,用75%酒精在容器表面進(jìn)行消毒。過濾前先將少量的0.1%蛋白胨溶液濕潤濾膜,取10瓶250 ml無菌硼酸溶液按薄膜過濾法濾人濾器中,用0.1%的無菌蛋白胨溶液沖洗,每次100 ml,分別沖洗0次、3次和5次,在最后一次沖洗液中加人含菌數(shù)小于100 efu/mL的試驗(yàn)菌液過濾。把100 ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基接至濾簡內(nèi)。另取- -裝有同體積培養(yǎng)基的容器加入等量試驗(yàn)菌作為對照。按規(guī)定溫度培養(yǎng)3~5 d。各試驗(yàn)菌同法操作。細(xì)菌培養(yǎng)(溫度30-~35 C)3 d,霉菌及酵母菌培養(yǎng)(溫度23~28 C)5 d。

結(jié)果判斷:培養(yǎng)結(jié)果與對照管比較，未沖洗的試驗(yàn)組中的試驗(yàn)菌均未生長，說明供試品的檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用;而沖洗3次和5次的試驗(yàn)組試驗(yàn)菌均生長良好,說明供試品的檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì),且沖洗次數(shù)為3次與5次時(shí),結(jié)果無明顯差異,故選擇沖洗量較少的3次。預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,見表1。

2.3無菌 檢查方法驗(yàn)證:實(shí)驗(yàn)方法同預(yù)實(shí)驗(yàn)，沖洗次數(shù)為3次,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。結(jié)論:硼酸溶液無菌檢查采用薄膜過濾法,沖洗次數(shù)為3次。

2.4樣品驗(yàn)證: 取20瓶250 ml無菌硼酸溶液，采用智能集菌儀NAI-JJY-Z, Py330封閉式薄膜過濾器過濾。過濾前先將少量的0.1%蛋白胨溶液濕潤濾膜,樣品直接過濾,濾畢,每濾器加無菌0.1%蛋白胨溶液充分振搖,過濾,反復(fù)沖洗濾膜,沖洗量每次為100 ml,沖洗3次，沖洗后取其中2個(gè)濾器各加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100 ml,其中1個(gè)加人含菌數(shù)<100cfu/ml的金黃色葡萄球菌菌懸液作為陽性對照管，另管為供試品細(xì)菌培養(yǎng)管;取另外2個(gè)濾器各加改良馬丁培養(yǎng)基100ml,其中一個(gè)加入含菌數(shù)小于100 cfu/ml的白色念珠菌菌懸液作為陽性對照管，另1管為供試品真菌培養(yǎng)管。分別放人細(xì)菌培養(yǎng)箱中30~35 C培養(yǎng)14d,霉菌、酵母菌培養(yǎng)箱中,23~28 C培養(yǎng)14 d,應(yīng)無菌生長。陽性對照管24- 48 h內(nèi)應(yīng)生長良好。

硼酸溶液對細(xì)菌、真菌均有抑菌性,本方法通過薄膜過濾，沖洗來消除硼酸溶液的殺菌性。沖洗量太小，無法完全消除其抑菌性,造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陰性;沖洗量過大,則可能損傷膜上可能存在的微生物。方法驗(yàn)證中,分別用100 ml沖洗液,沖洗了3次和5次，進(jìn)行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn),2種沖洗量結(jié)果無明顯差異,故選用沖洗次數(shù)較少的3次，進(jìn)行樣品檢驗(yàn)。